本文標(biāo)題："FCM的一般操作步驟及樣品制備都有什么要求"

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FCM的一般操作步驟及樣品制備都有什么要求

  了解FCM的一般操作步驟及樣品制備要求。
    (1)樣品制備:FCM分析的細(xì)胞均為單細(xì)胞懸液。測量白細(xì)
胞的血液標(biāo)本要在溶解紅細(xì)胞后，通過梯度離心法分離出單個(gè)核
細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)，從而制成細(xì)胞懸液。
   骨髓細(xì)胞、淋巴結(jié)、扁桃體、腫瘤組織等細(xì)胞團(tuán)塊要用機(jī)械
法或酶法打散制成細(xì)胞懸液。
    ①機(jī)械處理法:取新鮮組織塊0.5-1-08,剪碎，置扎于小燒杯
口上的150目尼龍網(wǎng)上，用扁形小匙加壓研磨，用0. lmol/L磷酸
鹽緩沖液(pH7. 2)沖洗單細(xì)胞入小燒杯內(nèi)，再將細(xì)胞懸液經(jīng)200目
尼龍網(wǎng)波過，加入無水乙醇固定保存。
   ②酶消化法:取1 ml 0. 5%胃蛋白酶液(溶于pH 1. 8鹽酸生理鹽
水中)或1%膠原酶液(pH 7. 0)加入標(biāo)本中.37°C恒溫震搖15-30 min,
除去未消化的組織塊，200目尼龍網(wǎng)取單細(xì)胞，乙醇固定.當(dāng)采用
石蠟包埋的組織時(shí)。可切成30um厚的切片3-4張，取2張切片放人
10 ml玻璃試管中，加5 ml二甲苯脫蠟，37°C置10min,重復(fù)3次，
依次經(jīng)5 ml 100%、95%、 70%和50%乙醉水化，室溫每次10 min,蒸
餾水洗兩次.加2 mlPH1.6的0.5%胃蛋白酶水溶液，置37℃水浴箱振
蕩消化30 min，用2 ml PBS終止消化，經(jīng)160目(76um)的尼龍網(wǎng)過慮
制成單細(xì)胞懸液。
    ③機(jī)械法加酶法:將組織盡量剪碎，加乙醉固定，分析前用酶
法處理10-15min,制成單細(xì)胞懸液。

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